Прием плазмалогена с пищей увеличивает содержание плазмалогена в мембранахэритроцитов у крыс

Mawatari et al. Lipids in Health and Disease 2012,11:161

http://www.lipidworid.com/content/11/1/161

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23170810/

Широ Маватари1*, Тосихико Катафучи 2, Кийотака Миаке3 и Такехико Фудзино4

* Ответственный автор: mawatari@rheology.po-jp.com

1Институт реологической функции питания, 2241 Kubara, Hisayama-chou, Kasuya-gun, Fukuoka 811-2501, Japan

Полные сведения об авторах приведены в конце статьи.

© 2012 Mawatari et al.; лицензиат BioMed Central Ltd. Настоящая статья находится в открытом доступе в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0~~HEAD=pobj), разрешающей неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Автореферат

Введение: Известно о многих заболеваниях, связанных с дефицитом плазмалогенов. Увеличение содержания или замещение плазмалогенов в тканях могло бы благотворно влиять на состояние пациентов, страдающих от таких заболеваний, однако информация о воздействии пищевых плазмалогенов на млекопитающих отсутствует.

Метод: Плазмалогены были получены из куриной кожи. Очищенные плазмалогены содержали 96,4% этаноламин-плазмалогена (PlsEtn), 2,4% холин-плазмалогена (PlsCho) и 0,5% сфингомиелина (SM). Крысам была предложена диета, содержащая 0,1% очищенных плазмалогенов (диета PlsEtn). Для определения относительного содержания фосфолипидов был использован метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), позволяющий разделять интактные плазмалогены и все другие классы фосфолипидов за один хроматографический прогон.

Результаты: Следствием приема диеты PlsEtn, которую крысы Цукер, страдающие диабетом и ожирением (ZDF), получали в течение 4 недель, стало снижение уровня холестерина и фосфолипидов в плазме по сравнению с контрольной диетой. Результаты других стандартных лабораторных анализов плазмы, в том числе на триглицерид и глюкозу, печеночная и почечная функция, уровень альбумина и масса тела не показали изменений. В группе, получавшей диету PlsEtn, относительное содержание PlsEtn эритроцитов и фосфатидилэтаноламина (PE) увеличилось, а относительное содержание фосфатидилхолина (PC) уменьшилось. Прием диеты PlsEtn здоровыми крысами в течение 9 недель также привел к снижению уровня холестерина и фосфолипидов в плазме и вызвал увеличение относительного содержания PlsEtn в мембране эритроцитов. Результаты других стандартных лабораторных анализов плазмы и масса тела не показали изменений.

Выводы: Прием пищевого PlsEtn увеличивает относительное содержание PlsEtn в мембране эритроцитов у здоровых крыс и крыс ZDF и снижает уровень холестерина и фосфолипидов в плазме.  Прием пищевого PlsEtn в течение 9 недель не оказал негативного влияния на состояние здоровых крыс.

Ключевые слова: Пищевой плазмалоген, крыса Цукер, страдающая диабетом и ожирением, крыса Вистар, фосфолипиды эритроцитов, фосфолипиды плазмы

Введение

Плазмалогены являются глицерофосфолипидами, для которых характерна винилэфирная связь в положении sn-1 основной цепи глицерола и эфирная связь в положении sn-2. Положение sn-1 чаще всего связано с жирными спиртами C16, С18, или С18:1, а положение sn-2, как правило, занимает полиненасыщенная жирная кислота, в частности, арахидоновая кислота (ARA) или докозагексаеновая кислота (DHA) [1-5]. Плазмалогены присутствуют почти во всех тканях млекопитающих и составляют около 18% от общего объема фосфолипидов в клеточных мембранах, причем этаноламин-плазмалогены (PlsEtn) встречаются намного чаще, чем холин-плазмалогены (PlsCho), за исключением сердечной и скелетной мышечной ткани [1-5]. Плазмалогены не только являются структурным компонентом мембраны и хранилищем вторичных посредников у млекопитающих, но и могут участвовать в процессах мембранного синтеза, переноса ионов и оттока холестерина [1-5]. Винилэфирная связь в положении sn-1 делает плазмалогены более восприимчивыми к окислительному стрессу по сравнению с соответствующими глицерофосфолипидами с эфирными связями. Поэтому плазмалогены могут также выступать в качестве антиоксидантов, защищающих клетки от окислительного стресса [1-5].

Биосинтез плазмалогенов начинается в пероксисомах, и встречающаяся у людей наследственная пероксисомная патология, ризомелическая точечная хондродисплазия (RCDP), проявляется в дефиците плазмалогенов тканей различных органов и вызывает серьезные расстройства многих тканей и органов, таких как скелет, мозг, хрусталик глаза, почки и сердце [2-5]. RCDP может быть прямым следствием дефицита плазмалогенов и указывает на важность плазмалогенов в организме человека. В то же время, вторичный дефицит плазмалогенов наблюдается при метаболических и воспалительных заболеваниях, таких как сахарный диабет, сердечные заболевания, рак, респираторные заболевания и болезнь Альцгеймера [3,4]. Вторичный дефицит плазмалогенов может быть следствием замедления синтеза и/или ускорения распада плазмалогенов. Пополнение и/или замещение плазмалогенов могло бы принести существенную пользу пациентам, страдающим этими заболеваниями при дефиците плазмалогенов.

Недавно был выполнен анализ данных о влиянии пищевых фосфолипидов на здоровье [6], который показал, что согласно большинству исследований пищевые фосфолипиды оказывают положительное воздействие при некоторых заболеваниях без каких-либо серьезных побочных эффектов. Однако диетические плазмалогены не были упомянуты [6].

Плазмалогены были получены нами из куриной кожи. Мы предлагали диету, содержащую 0,1% очищенных плазмалогенов крысам Цукер, страдающим диабетом и ожирением (ZDF), и здоровым крысам линии Вистар. Были выполнены обычные лабораторные исследования плазмы крови (в том числе, на общее содержание фосфолипидов) и анализ фосфолипидного состава плазмы и эритроцитов.

Результаты и анализ

Очищенные плазмалогены, полученные из куриной кожи, состояли, согласно расчету по хроматографической области ВЭЖХ, из 96,4% этаноламин-плазмалогенов (PlsEtn), 2,6% холин-плазмалогенов (PlsCho), 0,5% SM и 0,7% других фосфолипидов (таблица 1, рис. 1). Время удерживания хроматографических пиков PlsEtn и PlsCho соответствовало времени удерживания PlsEtn и PlsCho эритроцитов мембраны крысы (рис. 1). Пики исчезали после обработки соляной кислотой (НСl), что означает, что пики соответствовали плазмалогенам [7,8] (данные не показаны). Жирные кислоты PlsEtn состояли из DHA (22:6), ARA (20:4), олеиновой кислоты (18:1), миристиновой кислоты (14:0), пальмитиновой кислоты (16:0) и стеариновой кислоты (18:0) (Таблица 1), что соответствует составу обычных плазмалогенов в тканях млекопитающих [1-4].

Таблица 1 Фосфолипидный состав очищенных плазмалогенов и жирнокислотный состав PlsEtn в очищенных плазмалогенах

Фосфолипидный составЖирнокислотный состав PlsEtn


Жирная кислота
PlsEtn96.4%14:05.4%
PlsCho2.6%16:07.1%
SM0.5%18:03.5%
LPE0.7%18 135.4%


18:29.5%


20:432.7%


22:66.4%
Сокращения; PlsEtn, этаноламин-плазмалоген; PlsCho, холин-плазмалоген; SM, сфингомиелин; LPE, лизофосфатидилэтаноламин.

Хроматограмма фосфолипидного анализа диеты PlsEtn имеет большой пик PlsEtn по сравнению с контрольной диетой. Это означает, что PlsEtn действительно содержится в диете PlsEtn (рис. 2).

Диета, содержавшая 0,1% масс. очищенных плазмалогенов (диета PlsEtn), вызвала у крыс ZDF снижение уровня фосфолипидов и холестерина в плазме в течение 4 недель (таблица 2). Однако результаты других стандартных лабораторных исследований плазмы, в том числе на триглицерол (TG), глюкозу, аланинаминотрансферазу (ALT), аспартатаминотрансферазу (AST), азот мочевины и альбумин, не отличались (таблица 2). Между группами на разной диете также не было отмечено различий в весе тела. Фосфолипидный состав плазмы, изученный по нашему методу ВЭЖХ, имел повышенное содержание SM в группе, поучавшей диету PlsEtn (таблица 3). Плазмалогены в плазме были обнаружены с помощью нашего метода ВЭЖХ, но были слишком малы, чтобы оценить изменения в них (таблица 3, рис. 3). Диета PlsEtn индуцировала повышение уровня PlsEtn и PE эритроцитов и снижение уровня PC эритроцитов (таблица 4).

Здоровые крысы линии Вистар были переведены на ту же диету PlsEtn на 9 недель. Диета PlsEtn вновь привела к снижению уровня фосфолипидов и холестерина в плазме, однако результаты других стандартных лабораторных анализов плазмы не изменились (таблица 5). Фосфолипидный состав плазмы не изменился (Таблица 6). В фосфолипидном составе мембран эритроцитов в группе на диете PlsEtn отмечено увеличение PlsEtn и тенденция к снижению PC (таблица 7).

Эти результаты показывают, что пищевые PlsEtn индуцируют снижение уровня холестерина и фосфолипидов в плазме как здоровых крыс, так и крыс ZDF. Известно, что пищевые фосфолипиды вызывают снижение уровня холестерина в плазме, вероятно, вследствие ингибирования кишечной абсорбции холестерина [6,9,10]. Существует информация о том, что пищевые PE, но не пищевые PC, вызывали снижение уровня фосфолипидов, холестерина и аполипопротеина A-1 в плазме крови крыс [11]. Таким образом, этаноламин-фосфолипиды, не только PlsEtn, вызывают снижения уровня фосфолипидов в плазме. Фосфолипидный состав плазмы здоровых крыс (Вистар) не изменился после 9 недель на диете PlsEtn (таблица 6). Другие стандартные лабораторные анализы плазмы также остались без изменений (таблица 5). Вес тела также не изменился после 9 недель на диете PlsEtn (таблица 5). Эти результаты показывают, что пищевые PlsEtn не оказали вредного воздействия для здоровых крыс несмотря на снижение уровня фосфолипидов и холестерина в плазме. Интересно отметить, что уровень триацилглицерола плазмы не изменился у крыс ZDF и крыс Вистре вследствие приема диеты PlsEtn несмотря на снижение уровня холестерина и фосфолипидов.

Фосфолипиды эритроцитов крысы

Очищенные плазмалогены

Рисунок 1 ВЭЖХ хроматограмма очищенного плазмалогена из куриной кожи. Время удерживания этаноламин-плазмалогенов (PlsEtn) и холин-плазмалогенов (PlsCho) соответствовало показтелям эритроцитов крысы. Другие сокращения: PE, фосфатидилэтаноламин; PC, фосфатидилхолин; SM-1 и SM-2, сфингомиелин; PS, фосфатидилсерин; PI, фосфатидилинозитол.

(Контрольная диета)

(Диета PlsEtn)

Рисунок 2 ВЭЖХ-хроматограммы фосфолипидов при контрольной диете и диете, обогащенной плазмалогенами (диета PlsEtn). Хроматограмма показывает, что плазмалогены (PlsEtn и PlsCho) действительно присутствуют в диете PlsEtn. Сокращения: см. рис. 1.

Диета PlsEtn, которую крысы ZDF получали в течение 4 недель, индуцировала повышение уровня PlsEtn и PE и снижение уровня PC в мембранах эритроцитов (таблица 4). Диета PlsEtn, которую крысы Вистар получали в течение 9 недель, также индуцировала повышение уровня PlsEtn и тенденцию к снижению PC в мембранах эритроцитов (таблица 7). В жирнокислотном составе PlsEtn + PE наблюдалось увеличение содержания ARA (20:4) и уменьшение содержания олеиновой кислоты (18:1) (таблица 8). Увеличение содержания ARA в PlsEtn мембраны эритроцитов может отражать жирнокислотный состав PlsEtn в диете (таблица 1). Эти результаты анализа мембран эритроцитов свидетельствую о том, что пищевые PlsEtn могут увеличивать относительную концентрацию PlsEtn в тканях.

Таблица 2 Изменения в холестерине и фосфолипидах плазмы у крыс ZDF после 4 недель на диете PlsEtn


Контрольная диета (n = 10)Диета PlsEtn (n = 10)t-критерий
Chol (общ.) (мг / 100 мл)206,3 ± 17,4173,5 ± 15,3p < 0.001
HDL-chol (мг / 100 мл)603 ±14.157.5 ±9.6
LDL-chol (мг / 100 мл)9.2 ±4.45.1 ±2.4p < 0.02
TG (мг / 100 мл)1267.4 ±367.91244.6 ±361.2
P-lipid (мг / 100 мл)466.5 ±35.54093 ±51.1p < 0.01
Глюкоза (мг / 100 мл)541.9 ±172.8507.5 ±155.2
Urea N (мг / 100 мл)19.6 ± 1.619.0 ±2.1
AST (МЕ/л)135.6 ±94.2126.5 ±114.8
ALT (МЕ/л)96.1 ±57.788.3 ±83.9
Альбумин (г / 100 мл)4.6 ±0.34.5 ±0.3
Вес тела (г)407.5 ± 30.9391.5 ±40.1
Сокращения: chol, холестерин; HDL, липопротеин высокой плотности; LDL, липопротеин низкой плотности; TG, триацилглицерин; P-lipid, фосфолипид; Urea N, азот мочевины; AST, аспартатаминотрансфераза; ALT, аланинаминотрансфераза. Представлены средние значения ± ср. кв. отклонение.

Большинство диетических глицерофосфолипидов могут быть гидролизованы в положении SN-2 панкреатической фосфолипазой А2 в просвете кишечника, а затем абсорбированы энтероцитами в качестве свободных жирных кислот и лизофосфолипидов [6,12]. Существует информация о присутствии плазмалоген-активной фосфолипазы А2 в эпителии тонкой кишки [13]. Поскольку плазмалогены содержат винилэфирную связь в положении sn-1 глицерина, лизофосфолипиды, полученные из пищевых плазмалогенов после переваривания фосфолипазой А2, содержат винилэфирную связь. Известно, что пищевые алкильные глицеролы всасываются из пищеварительного тракта неизменными без расщепления эфирной связи [14-18]. Однако неизвестно, всасывается ли неповрежденной винилэфирная связь пищевых фосфолипидов. Винилэфирная связь (1-0 алк-1′-энил-sn-глицерол) не тождественна эфирной связи алкильных глицеролов (1-0 алкил-sn-глицерол). Известно, что винилэфирная связь особенно чувствительна к HCl [7,8]. Сообщается об исследовании, в котором при диете, содержащей 10% фосфолипидов мозга быка, не наблюдалось деградации плазмалогенов в лабораторных условиях, имитирующих желудок и просвет тонкого кишечника, а прием 10% фосфолипидов мозга быка привел к повышению уровня плазмалогенов в плазме крови [19]. Поэтому вероятно, что лизофосфолипиды (лизоплазмалогены), содержащие винилэфирную связь, полученную из пищевого PlsEtn, всасываются неизсенными из кишечника крысы.

Таблица 3 Фосфолипидный состав плазмы у крыс ZDF после приема диеты PIsEtn в течение 4 недель


Контрольная диета (n = 10)Диета PlsEtn (n = 10)t-критерий
PlsEtn0.39 ±0310.56 ±026
PE0.46 ±0.100.63 ±0.22
PlsCho023 ±0.110.35 ±0.10
PC87.66 ±1.1486.88 ±1.00
PI2.53 ±0.252.55 ±0.23
SM2.08 ±0.472.67 ±0.40p < 0.01
LPC5.60 ±0.775.40 ±0.84
Представлен % от общего количества фосфолипидов, рассчитанный по хроматографической области, обнаруженной испарительным нефелометрическим детектором (среднее ± ср. кв. отклонение).

Поскольку 1-0-алкилглицерол принимает участие в биосинтезе плазмалогенов после пероксисомального этапа, сообщается о лечении наследственных пероксисомных патологий, основанном на замещении плазмалогенов, с помощью пищевых 1-0 алкилглицеролов, которое привело к повышению уровня плазмалогенов в некоторых тканях [15-18,20] , В работе (Wood et al.) [20,21] описывается успешный синтез предшественника алкил-диацильного плазмалогена с использованием пальмитиновой кислоты в sn-1, DHA в sn-2 и липоевой кислоты в sn-3 (PPI-1011). Сообщается, что PPI-1011 пополнил PlsEtn культивируемых лимфоцитов пациентов c RCDP [20], а пероральное введение PPI-1011 кроликам в течение 2 недель повысило уровень DHA и DHA-содержащих PlsEtn в плазме и сетчатке глаза [21].

Прием крысами диеты PlsEtn увеличил относительное содержание PlsEtn в мембранах эритроцитов в течение 4 недель, а прием той же диеты здоровыми крысами в течение 9 недель также увеличил относительное содержание PlsEtn в эритроцитах. Настоящее исследование показывает, что пищевой PlsEtn безопасен для здоровых крыс, несмотря на снижение уровня  фосфолипидов плазмы. Пероральное введение очищенных плазмалогенов может быть более эффективным при пополнении и/или замещении плазмалогенов тканей, чем пероральное введение алкильных глицеролов или предшественника алкил-диацильных плазмалогенов (PPI-1011), потому что вводимый плазмалоген может стать источником глицерола с винилэфирными связями, этаноламина, холина и полиненасыщенных жирных кислот, таких как DHA и ARA, и все эти вещества могут быть повторно использованы в биосинтезе плазмалогенов в различных тканях.

Недавно мы сообщали, что предварительное внутрибрюшинное введение очищенного плазмалогена из мышцы куриной грудки (содержит 47,6% PlsEtn и 49,3% PlsCho) ослабляет индуцированное липополисахаридом нейровоспаление [22]. Однако пока не установлено, повышают ли пищевые плазмалогены содержание плазмалогенов в тканях мозга при дефиците плазмалогенов.

Материалы и методы

Получение очищенных плазмалогенов

Плазмалогены были получены из куриной кожи. Куриная кожа была приобретена на рынке. Большая часть жира была сперва удалена с кожи в паровой печи, затем кожа была высушена вымораживанием. Плазмалогены были получены из сублимированной кожи по ранее описанной методике [23].

Рисунок 3 Репрезентативная ВЭЖХ-хроматограмма фосфолипидов плазмы крыс Вистар. Плазмалогены (PlsEtn и PlsCho) в плазме крыс были обнаружены описанным нами методом (A), но были слишком малы, чтобы оценить изменения в плазмалогенах, несмотря на увеличение хроматографа (B). LPC, лизофосфатидилхолин; другие аббревиатуры – см. рис. 1.

Животные и диеты

Диету, содержащая 0,1% масс. очищенных плазмалогенов (диета PlsEtn), получали путем добавления очищенных плазмалогенов к контрольной диете (AIN 96). Диеты были приготовлены и поставлены компанией Oriental Yeast Co (Токио, Япония).

Все эксперименты, связанные с использованием животных, были проведены в соответствии с Руководящими принципами по уходу и использованию животных Физиологического общества Японии. Были приложены все усилия к тому, чтобы свести к минимуму страдания животных и количество животных, использованных в экспериментах.

Таблица 4 Изменения фосфолипидного состава эритроцитов крыс ZDF после приема диеты PlsEtn в течение 4 недель


Контрольная диета (n = 10)Диета PlsEtn (n = 10)t-критерий
PlsEtn14.58 ±0.7615.65 ±0.75p < 0.006
PE7.94 ±0.548.82 ±0.58p < 0.003
PlsCho0.39 ±0.080.43 ±0.07
PC62.69 ±2.7659.74 ±153p < 0.001
PS4.21 ±1.044.66 ±0.47
PI0.91 ±0.211.04 ± 0.15
SM9.27 ±0.639.66 ±0.52
Представлен % от общего количества фосфолипидов, рассчитанный по хроматографической области, обнаруженной испарительным нефелометрическим детектором (среднее ± ср. кв. отклонение).

Все крысы были приобретены в компании KBT Oriental Co. (Тосу, префектура Сага, Япония). Двадцать самцов крысы ZDF в возрасте 4 недель получали контрольную диету в течение 10 дней и были разделены на две группы случайным образом. Одна группа (10 крыс) получала контрольную диету в течение еще 4 недель (группа на контрольной диете), а остальные группы (10 крыс) получали диету PlsEtn (группа на диете PlsEtn) в течение 4 недель. В другом эксперименте 18 самцов крыс линии Вистар в возрасте 6 недель получали контрольную диету в течение 10 дней и были разделены на две группы. Одна группа получала контрольную диету в течение еще 9 недель (группа на контрольной диете), а другая группа получала диету PlsEtn в течение 9 недель. Все крысы были размещены в клетках из нержавеющей стальной проволоки в комнате с кондиционером (22°C) и 12-часовым циклом света и темноты. Они имели свободный доступ к воде и питанию согласно диете.

Таблица 5 Изменения в холестерине и фосфолипидах плазмы у крыс Вистар после 9 недель на диете PlsEtn


Контрольная диета (n = 8)Диета PlsEtn (n = 8)t-критерий
Chol (общ.) (мг / 100 мл)98.4 ±15.681.1 ±103p < 0.05
HDL-chol (мг / 100 мл)53.6 ±11343.9 ±7.8p < 0.07
LDL-chol (мг / 100 мл)22.1 ± 7.316.6 ±5.5p < 0.10
TG (мг / 100 мл)145.1 ±76.7156.5 ±73.7
P-lipid (мг / 100 мл)183.3 ±22.9152.7 ±173p < 0.01
Глюкоза (мг / 100 мл)232.7 ±36.8220.9 ±36.7
Urea N (мг / 100 мл)12.9 ± 1.913.1 ±13
AST (МЕ/л)51.8 ±4353.4 ±4.9
ALT (МЕ/л)24.9 ±3.623.3 ±3.7
Альбумин (г / 100 мл)4.4 ±0.24.3 ± 0.4
Вес тела (г)478.8 ±19.1453.6 ±21.5
Сокращения: chol, холестерин; HDL, липопротеин высокой плотности; LDL, липопротеин низкой плотности; TG, триацилглицерин; P-lipid, фосфолипид; Urea N, азот мочевины; AST, аспартатаминотрансфераза; ALT, аланинаминотрансфераза. Представлены средние значения ± ср. кв. отклонение.

Таблица 6 Фосфолипидный состав плазмы у крыс Вистар после приема диеты PlsEtn в течение 9 недель


Контрольная диета (n = 8)Диета PlsEtn (n = 8)
PlsEtn0.36 ±0.180.41 ±023
PE0.34 ±0.150.38 ±0.17
PlsCho0.43 ±0.110.39 ±0.05
PC80.11 ±1.2479.95 ±1.49
SM5.78 ±0.816.46 ±1.65
PI3.03 ±0.292.63 + 0.33
LPC9.89 ±0.849.73 ±1.11
Представлен % от общего количества фосфолипидов, рассчитанный по хроматографической области, обнаруженной испарительным нефелометрическим детектором (среднее ± ср. кв. отклонение).

Получение эритроцитов

Крыс лишали пищи на 14 – 16 часов и после введения в эфирный наркоз отбирали кровь в пробирку, содержащую ЭДТК, путем сердечной пункции. Плазму крови отделяли центрифугированием при 1000 g в течение 5 мин. Эритроциты получали после сбора плазмы. После удаления лейкоцитарной пленки и небольшой части верхнего слоя эритроцитов, эритроциты промывали три раза в холодном изотоническом солевом растворе при 1000 g в течение 5 мин при 4˚С. Небольшую часть верхнего слоя удаляли при каждой промывке.

Биохимический анализ плазмы

Часть плазмы была направлена в клиническую лабораторнию (CRC Co, Осака, Япония) для проведения стандартных клинических лабораторных исследований плазмы. В частности, фосфолипидный состав плазмы был установлен с использованием автоматизированного анализатора (Olympus AU-5200) для определения общего содержания холестерина, фосфолипидов и триацилглицерола соответствующим ферментативным способом (тесты Cholsterol-C, Phospholipid-В и Triglyceride-G, Wako Pure Chemical Co, Осака, Япония).

Таблица 7 Изменения фосфолипидного состава эритроцитов крыс Вистар после приема диеты PlsEtn в течение 9 недель


Контрольная диета (n = 8)Диета PlsEtn (n = 8)t-критерий
PlsEtn15.76 ±0.7816.61 ±0.83p < 0.03
PE8.45 ±0.718.35 ±0.49
PlsCho052 ±0.120.51 ±0.09
PC57.91 ±2.0456.71 ±0.91p < 0.08
PS4.81 ±0.924.91 ±0.99
PI1.11 ±0.211.21 ±0.37
SM10.32 ±1.0910.64 ±0.62
Представлен % от общего количества фосфолипидов, рассчитанный по хроматографической области, обнаруженной испарительным нефелометрическим детектором (среднее ± ср. кв. отклонение).

Таблица 8 Изменения жирнокислотного состава эритроцитов крыс Вистар после приема диеты PlsEtn в течение 9 недель

Жирная кислотаКонтрольная диета Диета PlsEtnt-критерий
[A] Жирнокислотный состав эритроцита PlsEtn + PE
22:6+ 14:05.46 ±0.525.70 ±0.38
20:430.67 ±4.8935.06 ±2.91p < 0.05
18210.21 ±1.2610.33 ±0.50
18:118.53 ±2.2917.69 ±1.94
16:023.17 ±2.6820.87 ±1.60p < 0.06
18:010.05 ±2.138.02 ±1.49p < 0.05
проч.1.92 ±0.442.33 ±0.81
[B] Жирнокислотный состав эритроцита PC
22:6+ 14:02.32 ±0.412.41 ±0.32
20:48.63 ± 2.8911.01 ±1.71p < 0.07
18210.12 ± 1.1211.76 ±0.94
18:111.63 ±0.7311.58 ±0.47
16:048.81 ±3.4445.64 ±3.07p < 0.07
18:016.21 ±1.0815.33 ±1.30
проч.2.28 ±0.41229 ±0.47
Представлен % от общего количества жирных кислот (среднее ± ст. кв. отклонение).

Получение общих липидов

Экстракция общих липидов из эритроцитов была произведена сразу же после получения отмытых эритроцитов [8,23,24]. 500 мкл уплотненных эритроцитов подвергли гемолизу в равном объеме воды. К лизату добавили 4 мл метанола, а затем через 40 минут 4 мл хлороформа. Еще через 30 мин экстракт был центрифугирован, а остаток повторно экстрагирован 4 мл смеси метанола и хлороформа (1:1). Объединенные экстракты были промыты 10 мл KCl 0,88% для получения двухфазной смеси. 2 мл нижней фазы высушили в потоке газообразного азота. Общие липиды из плазмы (500 мкл) были получены тем же способом, что и из эритроцитов. Метанол и хлороформ, использованные при экстракции липидов, содержали бутилгидрокситолуол (50 мг/л).

Разделение фосфолипидных классов

Разделение фосфолипидных классов, включая плазмалогены (Pls), было проведено по описанному нами методу [8]. Была использована система ВЭЖХ Agilent HPLC (HP-1100 Series, Agilent Technologies, Токио, Япония) с испарительным нефелометрическим детектором, флуоресцентным детектором и УФ-детектором. Система была подключена к рабочей станции Chem Station (Agilent Technology), которая использовалась для контроля и анализа хроматограмм. Относительное содержание фосфолипидных классов было измерено в каждой хроматографической области с помощью испарительного нефелометрического детектора.

Анализ жирнокислотного состава фосфолипидов

Данные о каждом фосфолипиде были получены ВЭЖХ с УФ-детектором [23,24]. Результаты анализа жирнокислотного состава фосфолипидов соответствовали наших предыдущим работам [23,24].

Анализ данных

Мы проанализировали данные с использованием парного (двустороннего) t-критерия с уровнем значимости р <0,05.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что у них отсутствует конфликт интересов.

Вклад каждого из авторов

СМ провел все эксперименты и подготовил рукопись статьи. ТК принял участие в критическом обсуждении результатов. КМ получил очищенные плазмалогены. ТФ спланировал исследование и участвовал в критическом обсуждении результатов. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Благодарности

Это исследование было проведено благодаря частичному финансированию Национальной исследовательской организации Японии в области сельского хозяйства и питания.

Сведения об авторах

1Институт реологической функции питания, 2241 Kubara, Hisayama-chou, Kasuya-gun, Fukuoka 811-2501, Japan.

2Кафедра интегративной физиологии, Высшая школа медицинских наук Университета Кюсю, Fukuoka 812-8582, Japan.

3Центральный исследовательский институт, Marudai Food Co. Ltd, Osaka, Japan.

4Институт реологической функции питания, 2241 Kubara, Hisayama-chou, Kasuya-gun, Fukuoka 811-2501, Japan.

Получено: 5 сентября 2012 года

Принято: 18 ноября 2012 года

Опубликовано: 21 ноября 2012 года

doi:10.1186/1476-511X-11-161

Форма цитирования: Mawatari et al: Dietary plasmalogen increases erythrocyte membrane plasmalogen in rats. Lipids in Health and Disease 2012 11:161.

Полезное

Tamotsu в профилактике синдрома хронического информационного истощения

Tamotsu в профилактике синдрома хронического информационного истощения Как известно, в последнее время в современном обществе стали все чаще говорить о синдроме хронического информационного истощения (в

Полезное

Что такое plasmologen (плазмалоген)

Что такое plasmologen Термин «плазмалогены» (ПГ), как известно, применяется достаточно давно для обозначения класса глицерофосфолипидов (таких как этаноламин- и холинсодержащих), отличительной особенностью строения которых является